ACE色譜柱的選購需以分離目標為導向,綜合權衡固定相特性、物理參數及系統約束。建議優先評估樣品性質與分離目標,再匹配相應固定相,并通過實驗驗證優化方案。
以下是關于ACE色譜柱的選購要求的闡述:
一、明確應用目標與樣品特性
分析物性質
極性與溶解度:若需保留強極性化合物(如多肽、糖類),優先選擇親水嵌段固定相;疏水性樣品(如脂溶性維生素)則適用高碳載量的C18-HL柱。
酸堿性與穩定性:堿性化合物易與硅羥基發生次級作用,導致峰拖尾。應選用超惰性固定相(如C18系列),其通過堿滅活處理減少硅羥基殘留,提升分離效果。
分離模式需求
反相色譜:常規選擇C18或C8柱;若需增強對芳香族化合物的選擇性,可選用苯基柱。
方法開發靈活性:對于復雜混合物(如異構體),C18-AR或C18-PFP柱融合兩種鍵合相優勢,提供差異化選擇性。
二、核心物理參數選擇
粒徑與柱效
≤3μm粒徑:適用于UHPLC,柱效最高,但背壓顯著增加。
5μm粒徑:兼顧柱效與系統兼容性,是HPLC常用選擇。
≥10μm粒徑:用于快速篩選或制備級分離。
柱尺寸設計
長度:150mm為常規平衡選擇,250mm適用于復雜樣品,短柱用于高速分離。
內徑:標準分析選4.6mm,微量分析用2.1mm,制備級選10mm以上。
孔徑適配性
100Å:適用于小分子(分子量<1000 Da)。
300Å:大孔徑支持蛋白質、多肽等生物大分子的分離。
三、系統兼容性與操作考量
設備適配性
UHPLC系統:須選用亞2μm填料柱,耐受高壓。
制備型HPLC:選擇大內徑柱,降低堵塞風險。
流動相限制
高水相條件:C18-AQ柱采用極性嵌入技術,抑制親水作用,維持穩定保留。
pH值:避免使用傳統硅膠基質柱,可選擇雜化顆粒或聚合物柱。
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