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細胞毒性檢測試劑盒是藥物研發、化學品安全評估及環境毒理學中的“安全衛士”，通過量化藥物或化合物對細胞生長、代謝或膜完整性的影響(如細胞存活率、乳酸脫氫酶LDH釋放量)，快速篩選出有效且低毒的候選分子，顯著提高研發效率并降低動物實驗成本。
一、核心原理：靶向細胞活力的多維度檢測
主流試劑盒基于以下三種機制：
•MTT/Tetrazolium鹽法(檢測線粒體功能)：活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶(SDH)能將黃色的MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽)還原為紫色的甲瓚結晶(Formazan)，該結晶溶于DMSO后，在570nm處有較大吸光度，吸光度值與活細胞數量成正比(細胞毒性越大，甲瓚生成量越少，吸光度越低)。
•CCK-8法(更靈敏的MTT替代)：利用WST-8(2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽)在活細胞SDH作用下生成橙色水溶性甲瓚(450nm檢測)，無需有機溶劑溶解，操作更簡便且對細胞毒性更低。
•LDH釋放法(檢測膜完整性)：正常細胞膜完整，胞內LDH(乳酸脫氫酶)幾乎不釋放；當細胞膜受損(如藥物毒性導致溶解)時，LDH進入培養基，催化乳酸與NAD?生成丙酮酸與NADH，通過檢測培養基中NADH的還原產物(如Formazan或比色法)定量LDH活性，LDH釋放量越高，細胞膜損傷越嚴重。
二、藥物篩選中的關鍵應用：
•初篩階段：在96孔板中接種腫瘤細胞(如HeLa、A549，密度5×10³cells/well)，培養24小時后加入不同濃度的候選藥物(如抗癌小分子、天然提取物)，繼續培養48-72小時，用CCK-8法檢測細胞存活率(通常以未加藥組為100%)，計算半數抑制濃度(IC??，抑制50%細胞生長的藥物濃度)，篩選出IC??較低(高效)且對正常細胞(如人胚腎HEK293)毒性小(IC??>100μM)的候選分子。
•機制研究：結合Annexin V/PI凋亡檢測試劑盒，分析藥物誘導的是凋亡(早期凋亡率升高)還是壞死(LDH釋放為主)；通過檢測抗氧化酶(如SOD、CAT)活性，判斷藥物毒性是否與氧化應激相關。
•安全性評估：在化妝品、食品添加劑或環境污染物(如重金屬、農藥)的毒理學評價中，用細胞毒性檢測試劑盒確定安全濃度范圍(如LDH釋放<10%為無毒性，10%-30%為輕度毒性)，為后續動物實驗提供劑量參考。
操作時需注意細胞接種密度(影響代謝活性，通常每孔1×10?-1×10?cells)、藥物作用時間(避免過長導致非特異性死亡)及試劑空白對照(僅含培養基的孔，扣除背景吸光度)。細胞毒性檢測試劑盒以其高通量(96孔板單次檢測數十個樣本)、高靈敏度(IC??檢測限可達nM級)及低成本優勢，成為藥物研發的“第一道篩選關卡”，為精準醫療與化學品安全管理提供了科學依據。
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