凝膠滲透色譜的核心原理是基于分子尺寸大小的分離機制。它使用具有多孔結(jié)構(gòu)的凝膠作為固定相,當樣品溶液通過色譜柱時,不同分子量的高分子化合物會因體積差異而表現(xiàn)出不同的滲透能力。較大的分子無法進入凝膠顆粒的小孔,只能沿著顆粒間的間隙流動,因此路徑較短、流速較快;而較小的分子可以滲入更多毛孔內(nèi)部,導(dǎo)致其流動路徑更長、速度更慢。這種差異使得大分子先被洗脫出來,小分子后出峰,從而實現(xiàn)按分子量從大到小的順序依次分離。
分配與流動過程:樣品溶解于適當溶劑后注入色譜柱,在流動相(通常為有機溶劑)推動下穿過填料。由于不同大小的分子在多孔介質(zhì)中的擴散深度和滯留時間不同,形成與分子體積相關(guān)的保留時間分布。這一特性特別適用于分析聚合物、蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)的分子量分布及結(jié)構(gòu)特征。
校正與定量分析:通過已知標準品建立校準曲線,可將保留時間轉(zhuǎn)換為對應(yīng)的分子量數(shù)值,進而準確測定樣品中各組分的含量比例。該技術(shù)還支持普適校正方法,提高了跨實驗室數(shù)據(jù)的可比性。
凝膠滲透色譜(GPC)的測定步驟:
1.前期準備與樣品溶解
-選擇合適溶劑:根據(jù)樣品性質(zhì)選取能溶解它的流動相,如THF、DMSO或水相等;
-配制溶液:將適量樣品溶于所選溶劑中,確保均勻無顆粒物殘留,必要時進行過濾處理以避免堵塞色譜柱。
2.儀器開機預(yù)熱:啟動設(shè)備后等待系統(tǒng)穩(wěn)定,包括泵、檢測器等組件達到工作狀態(tài)。
3.基線校準:注入空白溶劑作為參比,建立穩(wěn)定的基線信號,用于后續(xù)數(shù)據(jù)分析時的扣除背景干擾。
4.進樣分析:通過自動進樣器或手動方式將處理好的樣品注入色譜柱頂端,記錄時間并開始數(shù)據(jù)采集。
5.數(shù)據(jù)采集與處理:利用軟件實時監(jiān)控流出曲線,計算重均分子量(Mw)、數(shù)均分子量(Mn)、Z均分子量(M)及分散系數(shù)(PDI),生成分子量分布圖。
6.清洗維護:實驗結(jié)束后用高純度溶劑沖洗管路和柱子,防止殘留物影響下次實驗結(jié)果。

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