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磷酸鹽緩沖液需要稀釋到多少才可以使用？
磷酸鹽緩沖液(PBS)是否需要稀釋以及稀釋到何種濃度，主要取決于具體實(shí)驗(yàn)需求。以下是不同場(chǎng)景下的稀釋建議及注意事項(xiàng)：
一、是否需要稀釋？
- 無(wú)需稀釋的場(chǎng)景
- 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：標(biāo)準(zhǔn)PBS(0.01 M，pH 7.4)可直接用于細(xì)胞洗滌、重懸或傳代培養(yǎng)。
- 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)：如Western blot、ELISA中樣本稀釋或洗滌，通常使用標(biāo)準(zhǔn)濃度。
- 組織學(xué)處理：組織切片漂洗、抗原修復(fù)后洗滌等，標(biāo)準(zhǔn)濃度即可滿足需求。
- 需要稀釋的場(chǎng)景
- 高鹽敏感實(shí)驗(yàn)：如某些蛋白質(zhì)透析或酶活性測(cè)定，需降低NaCl濃度(如稀釋至0.14 M)。
- 特殊細(xì)胞類(lèi)型：某些原代細(xì)胞(如神經(jīng)元)對(duì)滲透壓敏感，需用低鹽PBS(如0.001 M磷酸鹽+0.137 M NaCl)。
- 藥物穩(wěn)定性測(cè)試：模擬體內(nèi)低鹽環(huán)境時(shí)，可能需稀釋至生理鹽水濃度(0.9% NaCl，約0.15 M)。
二、常見(jiàn)稀釋比例及用途
| 稀釋比例 | 目標(biāo)濃度 | 典型用途 |
|---|---|---|
| 1:1（原液） | 0.01 M磷酸鹽 + 0.137 M NaCl | 細(xì)胞培養(yǎng)、Western blot、ELISA、免疫組化洗滌 |
| 1:10 | 0.001 M磷酸鹽 + 0.0137 M NaCl | 特殊細(xì)胞（如神經(jīng)元）洗滌、低鹽需求實(shí)驗(yàn) |
| 1:100 | 0.0001 M磷酸鹽 + 0.00137 M NaCl | **低鹽環(huán)境模擬（如某些酶活性測(cè)定） |
| 調(diào)整NaCl濃度 | 0.01 M磷酸鹽 + 0.014 M NaCl | 降低滲透壓至生理鹽水水平（0.9% NaCl） |
三、稀釋方法
- 體積比稀釋
- 示例：將10 mL標(biāo)準(zhǔn)PBS加入90 mL去離子水，得到1:10稀釋液。
- 工具：使用移液器或量筒精確量取，避免污染。
- 質(zhì)量體積比稀釋
- 適用場(chǎng)景：需精確控制NaCl濃度時(shí)（如配制0.01 M磷酸鹽 + 0.014 M NaCl）。
- 計(jì)算：根據(jù)目標(biāo)濃度計(jì)算所需NaCl質(zhì)量（如0.014 M × 58.44 g/mol × 1 L = 0.818 g NaCl/L）。
- 分步稀釋
- 步驟：先稀釋磷酸鹽濃度，再調(diào)整NaCl濃度（如需同時(shí)降低兩者）。
四、稀釋后驗(yàn)證
- pH測(cè)量
- 稀釋可能改變pH，需用pH計(jì)重新測(cè)定并調(diào)節(jié)至目標(biāo)值（如7.4）。
- 調(diào)整方法：滴加濃鹽酸（降低pH）或氫氧化鈉（升高pH）。
- 滲透壓檢測(cè)
- 使用滲透壓計(jì)驗(yàn)證稀釋液是否符合實(shí)驗(yàn)要求（如細(xì)胞培養(yǎng)需280-320 mOsm/kg）。
- 無(wú)菌性檢查
- 若稀釋后用于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，需通過(guò)濾膜過(guò)濾（0.22 μm）或高壓滅菌確保無(wú)菌。
五、注意事項(xiàng)
- 避免反復(fù)凍融
- 稀釋后的PBS應(yīng)分裝保存，避免反復(fù)解凍導(dǎo)致pH或滲透壓變化。
- 兼容性測(cè)試
- *次使用稀釋液時(shí)，需進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其對(duì)細(xì)胞活性或?qū)嶒?yàn)結(jié)果的影響（如MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞毒性）。
- 標(biāo)記與記錄
- 稀釋液需明確標(biāo)注濃度、pH、配制日期及滅菌狀態(tài)，避免混淆。
- 特殊實(shí)驗(yàn)需求
- 透皮吸收實(shí)驗(yàn)：可能需稀釋至與接收液成分一致（如含4% BSA的PBS）。
- 蛋白質(zhì)電泳：需使用無(wú)NaCl的磷酸鹽緩沖液（如Tris-Glycine系統(tǒng)）。