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ONPG生化管原理和使用方法
閱讀：72 發(fā)布時間：2025-11-1一、試驗用途及原理：
用于沙門氏菌和志賀氏菌、霍亂弧菌生化鑒定。
細(xì)菌分解乳糖依靠兩種酶的作用，一種是β-半乳糖苷酶滲透酶，它位于細(xì)胞膜上，可送乳糖分子滲入細(xì)胞，另一種β-半乳糖苷酶，亦稱乳糖酶，位于細(xì)胞內(nèi)，能使乳糖水解成半乳糖和葡萄糖。
具有上述兩種酶的細(xì)菌，能在24-48h發(fā)酵乳糖，而缺乏此兩種酶的細(xì)菌，不能分解乳糖。乳糖遲緩發(fā)酵菌只有β-半乳糖苷酶而缺乏β-半乳糖苷滲透酶，因而乳糖進(jìn)入細(xì)胞很慢，需經(jīng)培養(yǎng)基中1%乳糖較長時間的誘導(dǎo)，產(chǎn)生相當(dāng)數(shù)量的滲透酶后，才能較快分解乳糖，故呈遲緩發(fā)酵現(xiàn)象。
ONPG可迅速進(jìn)入細(xì)菌細(xì)胞，被β-半乳糖苷酶水解，釋放出黃色的臨位硝基苯酚，故由培養(yǎng)液變黃可迅速測知β-半乳糖苷酶的存在，從而確定該菌為乳糖遲緩發(fā)酵菌。
二、培養(yǎng)基配方（g/L）：
1%蛋白胨水 | 750mL |
ONPG | 1.5g |
磷酸鹽緩沖液 | 250mL |
pH 7.5 25℃ | |
三、試驗方法：
1. 將標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株接種到非選擇性肉湯中或采用其他制備方法，制成5 McFarland濁度（約109CFU/ml）的菌懸液。
2. 吸取0.05-0.08ml（約1-2滴）至生化管內(nèi)，36±1℃培養(yǎng)24h后，觀察實驗結(jié)果。
四、結(jié)果觀察與解釋
接種以下質(zhì)控菌株，36±1℃培養(yǎng)24h：
質(zhì)控菌株 | 菌株編號 | 生長情況 | 其他特征 |
大腸埃希氏菌 | ATCC25922 | +++ | 陽性，培養(yǎng)基變深黃色 |
霍亂弧菌 | / | +++ | 陽性，培養(yǎng)基變深黃色 |
福氏志賀氏菌 | CMCC(B)51572 | +++ | 陰性，培養(yǎng)基無色 |
宋內(nèi)志賀氏菌 | CMCC51592 | +++ | 陽性，培養(yǎng)基變深黃色 |
痢疾志賀氏菌 | CMCC51252 | +++ | 陰性，培養(yǎng)基無色 |
肺炎克雷伯氏菌 | CMCC46117 | +++ | 陽性，培養(yǎng)基變深黃色 |
傷寒沙門氏菌 | CMCC(B)50071 | +++ | 陰性，培養(yǎng)基無色 |
圖1-1 ONPG生化管質(zhì)控結(jié)果
五、注意事項
本培養(yǎng)基僅為細(xì)菌鑒定的一部分，需做其他補充試驗。
注:本文屬海博生物原創(chuàng),未經(jīng)允許不得轉(zhuǎn)載。