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激素 6 項(xiàng)檢測(cè)｜茁彩生物
閱讀：30 發(fā)布時(shí)間：2025-10-31激素 6 項(xiàng)（卵泡刺激素 FSH、黃體生成素 LH、雌二醇 E2、孕酮 PROG、睪酮 TEST、催乳素 PRL）是反映人體生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)功能的核心指標(biāo)，廣泛應(yīng)用于婦科疾病診斷、生殖健康評(píng)估、內(nèi)分泌紊亂篩查等場(chǎng)景。
（一）卵泡刺激素（FSH）
生理功能：由垂體前葉分泌，主要作用是促進(jìn)卵巢卵泡發(fā)育成熟（女性）、刺激睪丸生精小管生精（男性），是調(diào)節(jié)生殖細(xì)胞生成的關(guān)鍵激素；
（二）黃體生成素（LH）
生理功能：與 FSH 協(xié)同作用，女性中促進(jìn)排卵、維持黃體功能（分泌孕酮），男性中刺激睪丸間質(zhì)細(xì)胞分泌睪酮；
（三）雌二醇（E2）
生理功能：主要由卵巢顆粒細(xì)胞（女性）、腎上腺皮質(zhì)（男性）分泌，女性中調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜增殖、促進(jìn)乳腺發(fā)育、維持女性第二性征；男性中參與精子生成、維持骨密度；
（四）孕酮（PROG）
生理功能：主要由卵巢黃體（女性）分泌，作用是維持子宮內(nèi)膜分泌期狀態(tài)、支持胚胎著床與妊娠維持；男性中由腎上腺皮質(zhì)和睪丸分泌，參與睪酮代謝調(diào)節(jié)；
（五）睪酮（TEST）
生理功能：主要由睪丸間質(zhì)細(xì)胞（男性）、卵巢與腎上腺皮質(zhì)（女性）分泌，男性中維持精子生成、促進(jìn)肌肉發(fā)育、維持男性第二性征；女性中參與卵泡發(fā)育、調(diào)節(jié)*欲；
（六）催乳素（PRL）
生理功能：由垂體前葉催乳素細(xì)胞分泌，主要作用是促進(jìn)乳腺發(fā)育與乳汁分泌，同時(shí)抑制 FSH、LH 分泌，調(diào)節(jié)生殖功能；
茁彩生物采用的酶聯(lián)免疫競(jìng)爭(zhēng)法，是基于 “抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗體" 的免疫反應(yīng)原理，通過(guò)酶促顯色信號(hào)定量分析激素濃度，核心原理與操作設(shè)計(jì)如下：
競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合機(jī)制：檢測(cè)體系中存在兩種抗原 —— 待檢激素（樣本中的 FSH/LH/E2 等）與酶標(biāo)記激素（已知濃度，將激素與辣根過(guò)氧化物酶 HRP 或堿性磷酸酶 AP 偶聯(lián)），二者競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合固相載體（酶標(biāo)板）上的特異性抗體；
信號(hào)與濃度的負(fù)相關(guān)關(guān)系：樣本中待檢激素濃度越高，與抗體結(jié)合的量越多，酶標(biāo)記激素結(jié)合量越少，后續(xù)酶促反應(yīng)產(chǎn)生的顯色信號(hào)（吸光度值）越弱；反之，待檢激素濃度越低，顯色信號(hào)越強(qiáng)；
定量依據(jù)：通過(guò)繪制 “標(biāo)準(zhǔn)品濃度 - 吸光度值" 的標(biāo)準(zhǔn)曲線，將樣本的吸光度值代入曲線，計(jì)算得出待檢激素的準(zhǔn)確濃度。
試劑組成（茁彩生物試劑盒）
固相載體：包被有激素特異性單克隆抗體的 96 孔酶標(biāo)板，抗體與激素的結(jié)合特異性＞99%，交叉反應(yīng)率＜1%（如 FSH 抗體與 LH 的交叉反應(yīng)率＜0.5%）；
酶標(biāo)記物：HRP 標(biāo)記的激素抗原（如 HRP-FSH、HRP-TEST），標(biāo)記效率＞0.8（即每分子激素偶聯(lián)≥0.8 個(gè) HRP 分子），4℃儲(chǔ)存有效期 12 個(gè)月；
標(biāo)準(zhǔn)品：已知濃度的激素標(biāo)準(zhǔn)品，濃度梯度通常為 0、0.1、0.5、2、10、50IU/L（或 ng/mL、pg/mL，根據(jù)激素類(lèi)型調(diào)整），采用校準(zhǔn)品溯源至國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（如 WHO 標(biāo)準(zhǔn)品）；
底物溶液：HRP 對(duì)應(yīng)的底物為四甲基聯(lián)苯胺（TMB），在 HRP 催化下呈藍(lán)色，加入終止液（硫酸）后變?yōu)辄S色，最大吸收波長(zhǎng)為 450nm；
洗滌液：含 0.05% 吐溫 - 20 的磷酸鹽緩沖液（PBS，pH7.4），用于去除未結(jié)合的抗原與酶標(biāo)記物，減少非特異性結(jié)合；
終止液：2mol/L 硫酸溶液，用于終止酶促反應(yīng)，穩(wěn)定顯色信號(hào)。
檢測(cè)操作流程（茁彩生物標(biāo)準(zhǔn)化步驟）
（一）樣本采集與預(yù)處理
樣本類(lèi)型：優(yōu)先選用血清樣本（靜脈采血 3-5mL，室溫靜置 30 分鐘后離心，3000rpm×10 分鐘，取上層血清）；也可檢測(cè)血漿樣本（需使用 EDTA 或肝素抗凝管，避免溶血，溶血會(huì)導(dǎo)致 PRL、TEST 檢測(cè)結(jié)果偏高）；
樣本儲(chǔ)存：新鮮樣本需在 24 小時(shí)內(nèi)檢測(cè)；若需保存，2-8℃可保存 72 小時(shí)，-20℃可保存 3 個(gè)月（避免反復(fù)凍融，凍融次數(shù)不超過(guò) 2 次）；
樣本稀釋：對(duì)于濃度過(guò)高的樣本（如絕經(jīng)后 FSH、高催乳素血癥患者 PRL），需用試劑盒配套的稀釋液按 1:10 或 1:100 稀釋?zhuān)_保檢測(cè)結(jié)果落在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)（標(biāo)準(zhǔn)曲線線性相關(guān)系數(shù) R2≥0.99）。
（二）實(shí)驗(yàn)操作步驟（以 96 孔板為例）
試劑平衡：將酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物、標(biāo)準(zhǔn)品從冷藏環(huán)境（2-8℃）取出，室溫（20-25℃）平衡 30 分鐘，避免試劑溫度過(guò)低導(dǎo)致反應(yīng)不均；
加樣：
空白孔：加入 50μL 稀釋液，不加標(biāo)準(zhǔn)品與樣本；
標(biāo)準(zhǔn)品孔：依次加入 50μL 不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品（0、0.1、0.5、2、10、50IU/L 等）；
樣本孔：加入 50μL 預(yù)處理后的樣本；
3.加酶標(biāo)記物：每孔加入 50μL 酶標(biāo)記激素（HRP - 激素），輕輕振蕩酶標(biāo)板（300rpm×30 秒），確保液體充分混合；
4.孵育：將酶標(biāo)板密封，置于 37℃恒溫孵育箱中孵育 60 分鐘（孵育時(shí)間誤差≤5 分鐘，溫度波動(dòng)≤±0.5℃，否則影響結(jié)合效率）；
5.洗滌：棄去孔內(nèi)液體，每孔加入 300μL 洗滌液，靜置 30 秒后棄去，重復(fù)洗滌 5 次，最后一次洗滌后將酶標(biāo)板倒置在吸水紙上拍干（避免洗滌不充分導(dǎo)致非特異性顯色）；
6.顯色：每孔加入 50μL 底物溶液（TMB），避光室溫孵育 15 分鐘（避光孵育可防止底物分解，確保顯色穩(wěn)定）；
7.終止：每孔加入 50μL 終止液，輕輕振蕩混勻，10 分鐘內(nèi)測(cè)定吸光度值（終止后顏色穩(wěn)定 10 分鐘，超過(guò)時(shí)間會(huì)導(dǎo)致吸光度下降）；
8.讀數(shù)：使用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定各孔吸光度值（參考波長(zhǎng) 630nm，用于校正背景信號(hào)），記錄數(shù)據(jù)。
（三）標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制與濃度計(jì)算
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X 軸，對(duì)數(shù)坐標(biāo)），對(duì)應(yīng)的吸光度值為縱坐標(biāo)（Y 軸，線性坐標(biāo)），采用四參數(shù)邏輯斯蒂回歸（4-PL）擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，擬合公式為：
Y = (A - D) / [1 + (X/C)^B] + D
式中：A 為最大吸光度值（標(biāo)準(zhǔn)品濃度為 0 時(shí)），D 為最小吸光度值（標(biāo)準(zhǔn)品濃度無(wú)限大時(shí)），B 為曲線斜率，C 為半數(shù)抑制濃度（IC50），標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù) R2 需≥0.99；
樣本濃度計(jì)算：將樣本的吸光度值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得出樣本中待檢激素的濃度，若樣本已稀釋?zhuān)璩艘韵♂尡稊?shù)得到最終濃度（如稀釋 10 倍的樣本，計(jì)算濃度 ×10 為實(shí)際濃度）。