AtT-20小鼠垂體瘤細胞培養(yǎng)方法
在成功復蘇并傳代培養(yǎng)Att-20細胞后,需重點關注其生長狀態(tài)和培養(yǎng)環(huán)境的穩(wěn)定性。Att-20細胞貼壁生長,通常呈多邊形或梭形,若觀察到細胞形態(tài)異常或大量懸浮死亡,需排查培養(yǎng)基成分、血清質量或污染問題。
培養(yǎng)條件優(yōu)化
1. 培養(yǎng)基選擇:高糖DMEM(含10%胎牛血清)是常用基礎培養(yǎng)基,但可嘗試添加1%非必需氨基酸(NEAA)或2mM L-谷氨酰胺以促進增殖。
2. 傳代操作:細胞密度達80%-90%時需傳代,使用0.25%胰酶(含EDTA)消化1-2分鐘,輕柔吹打避免成團。離心后按1:3至1:4比例接種至新培養(yǎng)瓶。
3. 凍存要點:凍存液需含10% DMSO和90%血清,程序降溫后液氮保存,避免反復凍融。
常見問題解決
- 生長緩慢:檢查血清批次活性或補充5 ng/mL bFGF(堿性成纖維細胞生長因子)。
- 聚集成團:縮短消化時間或改用低濃度胰酶(0.05%)。
- 支原體污染:定期PCR檢測,必要時使用抗生素如Plasmocin處理。
應用提示
Att-20細胞常用于激素分泌研究(如ACTH),實驗前需確保細胞狀態(tài)穩(wěn)定,建議同步設置空白對照組。通過優(yōu)化培養(yǎng)細節(jié),可顯著提高實驗重復性與數(shù)據(jù)可靠性。
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